Воспаление роговой оболочки и пролиферативная активность клеток переднего эпителия при моделировании бактериального кератита и использовании амниотической мембраны с различным типом ее фиксации

Abstract

Актуальность. Молекулярные механизмы влияния амниотической мембраны на течение воспалительного процесса и регенерации роговицы в настоящее время интенсивно изучаются с использованием различных биологических маркеров. Цель. Определить зависимость между воспалением роговой оболочки и пролиферативной активностью клеток переднего эпителия на основании изучения экспрессии Ki-67, CD-68, ММР-9 при моделировании бактериального кератита и использовании криоконсервированной амниотической мембраны с различным типом её фиксации. Материал и методы. Экспериментальное исследование проведено на 60 кроликах (60 глаз) породы Шиншилла. Моделирование бактериального кератита проводили на одном глазу у каждого животного по предложенному нами способу, который заключался в послойной трепанации роговой оболочки кролика до 2/3 толщины стромы с инфицированием роговицы путем двукратной инстилляции в конъюнктивальную полость 1 мл бактериальной суспензии патогенного штамма Staphylococcus aureus (109 клеток/мл), полученного от больного, и последующей субконъюнктивальной инъекцией 0,1мл дипроспана. Через 2 недели после моделирования кератита проводили трансплантацию криоконсервированной амниотической мембраны (ТАМ). У 30 животных использовали технику inlay (1 слой) с фиксацией амниона восемью узловатыми швами нейлон 10/00 к роговице и у 30 – технику onlay (1 слой) с фиксацией мембраны восемью узловатыми швами шелк 8/00 к эписклере. Животных в каждой группе выводили из экспериментального исследования на 7, 14 и 30 сутки (по 10 животных на каждый срок). Иммуногистохимическое исследование проводили с использованием непрямого стрептавидин-пероксидазного метода выявления уровня экспрессии моноклональных антител (МКАТ) к СД68, Кi-67, ММР-9. Результаты. На седьмые сутки в обеих группах наблюдали покрытие раневой поверхности тонким эпителиальным слоем, состоящим из 2-3 слоёв эпителиальных уплощенных клеток без дифференциации по слоям. При этом отмечается экспрессия Ki-67 практически всеми уплощенными эпителиоцитами. Экспрессия CD68 выявлялась в поверхностных слоях стромы роговой оболочки, а также в виде муфт вокруг кровеносных сосудов и эндотелиоцитах в группе животных с послойной ТАМ. Экспрессии CD68 не выявлялось ни в одном случае в группе животных с биологическим покрытием АМ. Экспрессия MMP-9 выявлялась в эпителиоцитах переднего эпителия вне зависимости от степени его дифференциации, а также в стромальных кератоцитах в обеих группах. Характерным было наличие выраженной реакции в клетках амниотической мембраны. На 14 и 30 сутки полная эпителизация роговицы с дифференциацией клеток по слоям сопровождалась снижением или полным отсутствием пролиферативной активности эпителиоцитов в обеих группах. При этом отсутствовали признаки воспаления, за исключением участков вблизи шовного материала при использовании его для фиксации амниотической мембраны в группе с послойной ТАМ. Об этом свидетельствует отсутствие положительной реакции стромы роговой оболочки при выявлении экспрессии CD68 и MMP-9. Выводы. Особенности экспрессии исследуемых иммуногистохимических маркеров в роговице сходны в обеих группах. Принципиальные отличия экспрессии наблюдаются лишь в местах расположения шовного материала. Воспалительный процесс и снижение скорости эпителизации чаще происходит при фиксации амниотической мембраны шовным материалом к поверхности роговицы, то есть в группе животных, у которых применяли технику послойной трансплантации амниотической мембраны.