Воспаление роговой оболочки и пролиферативная активность клеток переднего эпителия при моделировании бактериального кератита и использовании амниотической мембраны с различным типом ее фиксации
Вантажиться...
Файли
Дата
ORCID
DOI
Науковий ступінь
Рівень дисертації
Шифр та назва спеціальності
Рада захисту
Установа захисту
Науковий керівник
Члени комітету
Назва журналу
Номер ISSN
Назва тому
Видавець
Анотація
Актуальность. Молекулярные механизмы влияния амниотической мембраны на течение воспалительного процесса и регенерации роговицы в настоящее время интенсивно изучаются с использованием различных биологических маркеров.
Цель. Определить зависимость между воспалением роговой оболочки и пролиферативной активностью клеток переднего эпителия на основании изучения экспрессии Ki-67, CD-68, ММР-9 при моделировании бактериального кератита и использовании криоконсервированной амниотической мембраны с различным типом её фиксации.
Материал и методы. Экспериментальное исследование проведено на 60 кроликах (60 глаз) породы Шиншилла. Моделирование бактериального кератита проводили на одном глазу у каждого животного по предложенному нами способу, который заключался в послойной трепанации роговой оболочки кролика до 2/3 толщины стромы с инфицированием роговицы путем двукратной инстилляции в конъюнктивальную полость 1 мл бактериальной суспензии патогенного штамма Staphylococcus aureus (109 клеток/мл), полученного от больного, и последующей субконъюнктивальной инъекцией 0,1мл дипроспана. Через 2 недели после моделирования кератита проводили трансплантацию криоконсервированной амниотической мембраны (ТАМ). У 30 животных использовали технику inlay (1 слой) с фиксацией амниона восемью узловатыми швами нейлон 10/00 к роговице и у 30 – технику onlay (1 слой) с фиксацией мембраны восемью узловатыми швами шелк 8/00 к эписклере. Животных в каждой группе выводили из экспериментального исследования на 7, 14 и 30 сутки (по 10 животных на каждый срок). Иммуногистохимическое исследование проводили с использованием непрямого стрептавидин-пероксидазного метода выявления уровня экспрессии моноклональных антител (МКАТ) к СД68, Кi-67, ММР-9.
Результаты. На седьмые сутки в обеих группах наблюдали покрытие раневой поверхности тонким эпителиальным слоем, состоящим из 2-3 слоёв эпителиальных уплощенных клеток без дифференциации по слоям. При этом отмечается экспрессия Ki-67 практически всеми уплощенными эпителиоцитами. Экспрессия CD68 выявлялась в поверхностных слоях стромы роговой оболочки, а также в виде муфт вокруг кровеносных сосудов и эндотелиоцитах в группе животных с послойной ТАМ. Экспрессии CD68 не выявлялось ни в одном случае в группе животных с биологическим покрытием АМ. Экспрессия MMP-9 выявлялась в эпителиоцитах переднего эпителия вне зависимости от степени его дифференциации, а также в стромальных кератоцитах в обеих группах. Характерным было наличие выраженной реакции в клетках амниотической мембраны. На 14 и 30 сутки полная эпителизация роговицы с дифференциацией клеток по слоям сопровождалась снижением или полным отсутствием пролиферативной активности эпителиоцитов в обеих группах. При этом отсутствовали признаки воспаления, за исключением участков вблизи шовного материала при использовании его для фиксации амниотической мембраны в группе с послойной ТАМ. Об этом свидетельствует отсутствие положительной реакции стромы роговой оболочки при выявлении экспрессии CD68 и MMP-9.
Выводы. Особенности экспрессии исследуемых иммуногистохимических маркеров в роговице сходны в обеих группах. Принципиальные отличия экспрессии наблюдаются лишь в местах расположения шовного материала. Воспалительный процесс и снижение скорости эпителизации чаще происходит при фиксации амниотической мембраны шовным материалом к поверхности роговицы, то есть в группе животных, у которых применяли технику послойной трансплантации амниотической мембраны.
Опис
Ключові слова
Бібліографічний опис
Середа КВ, Віт ВВ, Дрожжина ГІ, Гайдамака ТБ. Воспаление роговой оболочки и пролиферативная активность клеток переднего эпителия при моделировании бактериального кератита и использовании амниотической мембраны с различным типом ее фиксации. Матеріали науково-практичної конференції з міжнародною участю "Філатовські читання - 2016", присвяченої 80-річчю з дня заснування Інституту очних хвороб і тканинної терапії ім. В. П. Філатова НАМН України та XIV конгресу офтальмологічного товариства країн Причорномор'я; 19-20 травня 2016; Одеса, Україна. Одеса: ТЕС, 2016. с. 32-33.