Лизоцимсодержащий препарат для слезозаменительной терапии: получение, физико-химические свойства - Сотнікова, Олена Петрівна (My University, 2016)
Актуальность. Синдром сухого глаза (ССГ) - комплексное заболевание, с распространенностью 9-18 %, являющееся одной из основных проблем современной офтальмологии. В настоящее время ССГ определяется как комплекс признаков поражения роговичного и конъюнктивального эпителия вследствие снижения качества и/или количества слезной жидкости, которая формирует на поверхности глаза слезную пленку, выполняющую важнейшие функции: трофическую, защитную, оптическую. Нарушение состава или продукции слезной жидкости может привести к достаточно серьезным повреждениям переднего отрезка глаза, в том числе развитию бактериальных, грибковых и др. инфекционных процессов. Известно также, что при ССГ уровень гидролитического фермента лизоцима (КФ 3.2.1.17) в слезе, обладающего антимикробным, иммуностимулирующим, противовоспалителъным действием, как правило, снижен. В связи с этим, несмотря на присутствие на фармацевтическом рынке Украины широкого спектра препаратов искусственной слезы, актуальна разработка слезозамещающего препарата, обладающего также лечебными свойствами и содержащего «природный антибиотик» - лизоцим (ЛИЗ). Цель. Разработка глазных капель для слезозаменительной терапии, содержащих лизоцим, стабилизированный полимерами, и исследование физико-химических свойств препарата. Материал и методы. В работе использовали лизоцим белка куриного яйца (40000ед/мг), гидроксипропилметилцеллюлозу («Benecell», «Ashland Inc.,США»), декстран 60 («Biotica Bohemia s.r.o»,Чехия). Гидролитическую активность энзима определяли с помощью клеток Micrococcus lysodeikticus АТСС № 4698, содержание белка – по Лоури-Хартри. Лизоцимсодержащие капли готовили по разработанной методике, стерилизовали (фильтр «Millipore»), хранили при 0-4 ° С. Количество ЛИЗ для включения в растворы полимеров выбрано в соответствии с нормальным содержанием в слезе человека. Включение лизоцима в растворы полимеров проводили по разработанной методике. Вязкость и осмоляльность растворов изучали с использованием вискозиметра Оствальда и осмометра Tear Lab Osmolarity System. Результаты. Снижение кинематической вязкости растворов полимеров при добавлении ЛИЗ свидетельствует о межмолекулярных взаимодействиях, обеспечивающих стабилизацию энзима; кинематическая вязкость комплексного препарата составляет 1,1 мм2/с, что соответствует норме слезной жидкости. Полученный препарат (прозрачная, бесцветная жидкость) характеризуется полнотой включения белка и сохранения бактериолитической активности энзима (38200±2000 ед/см3). После стерилизующей фильтрации на протяжении 12 мес сохраняется 96,4% исходной активности лизоцима. Исследование физико-химических свойств энзима в каплях показало соответствие таковым свободного энзима (рН-оптимум =7,0-7,4; термооптимум 50-550 С). Значения плотности (0,966±0,003 г/см3) и осмоляльности (298±2 мОсм/дм3) препарата соответствуют требованиям, предъявляемым к таковым для слезозаменительной терапии. Выводы. Разработаны глазные капли для слезозаменительной терапии содержащие лизоцим, стабилизированный использованными растворами полимеров, с высокой бактериолитической активностью, длительного срока хранения, с показателями плотности и осмоляльности, близкими к слезе человека, перспективный для проведения медико-биологических исследований.